实验室器皿如何洗涤与消毒
2013-09-02

一、玻璃器皿的洗涤

  (一)、浸泡

  新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用稀盐酸溶液(5%)浸泡过夜;培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中;注意:让水能完全进入瓶皿中,不应留有气泡。

  (二)、刷洗

  浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤(宜选用软毛刷和优质的洗涤剂,如**洗衣粉或洗洁精),**不能使用含沙粒的去污粉!洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。

  (三)、浸泡

  器皿要充满清洁液,勿留气泡。浸泡时间不应少于6小时;一般应浸泡过夜。

  清洗液配方:

  【强液】 重铬酸钾 63g

  浓硫酸 1000ml

  蒸馏水 200L

  【次强液】 重铬酸钾 120g

  浓硫酸 200ml

  蒸馏水 1000ml

  【弱液】 重铬酸钾 100g

  浓硫酸 100ml

  蒸馏水 100ml

  矽酸钠洗液;

  使用比较安全,可以代替清洗液,但价格较贵。

  先配制成100Χ贮存液:矽酸钾80g,偏磷酸钠9g,加热溶解在1000ml蒸馏水中。使用时,用蒸馏水100倍稀释。

  (四)、冲洗

  刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,使之不留任何残迹。冲洗宜用洗涤装置,以保证冲洗效果,如用手工操作,每瓶都得用水灌满,倒掉,重复十次以上,**再用蒸馏水漂洗2~3次,凉干备用。

  二、胶塞的清洗

  新购置的胶塞先用自来水冲洗干净后,再做常规处理。

  常规洗涤方法:

  浸泡

  ↓

  2%NaOH煮沸(10~20分钟)

  ↓

  自来水冲洗

  ↓

  1%稀盐酸浸泡(30分钟)

  ↓

  自来水冲洗

  ↓

  蒸馏水清洗(2~3次)

  ↓

  凉干备用

  三、塑料器皿的清洗

  目前我国培养使用的塑料器皿主要是从国外购置的,是一种无毒并已经消毒过灭菌密封包装的商品。用时,只要打开包装即可,是一次使用性物品。必要时,用后经无菌处理后 ,尚可反复使用2~3次,但不宜过多。再用时仍然需要清洗和灭菌处理。塑料器皿质地软,不宜用毛刷刷洗,造成清洗困难。为此使用中一是防止划痕,二是用后要立即浸入水中,严防附着物干结;如残留有附着物,可用脱脂棉清拭掉,用流水冲洗干净,凉干、再用2%NaOH液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,然后 用5%盐酸溶液浸泡30分钟,**用自来水冲洗和蒸馏水漂洗干净,凉干后备用。

  消 毒

  一、紫外线消毒

  紫外线直接照射法很方便,效果好,是目前各实验室常用的消毒法。

  【适用范围】空气、操作台表面和一些不能使用其它方法进行消毒的培养器皿(如塑料培养皿、培养板等)

  【要求】(1)培养室的紫外线灯应距地面2.5米,使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射,才能发生有效的消毒作用。(2)由于各种细菌对紫外线的敏感性不同,所用照射时间和剂量也不同。

  【缺点】(1)产生臭氧,污染空气,对身体有害;(2)射线照射不到的部位起不到消毒作用,故消毒时,物品不宜相互遮挡。

  【注意】 有人习惯于边照射边进行实验操作,这样不好,一是紫外线对细胞、试剂和培养液都有不良影响,二是对人体皮肤也有伤害。

  二、湿热消毒

  湿热消毒即高压蒸汽消毒,是*有效的一种方法。

  【适用范围】布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液。

  【要求】

  培养用液、橡胶制品 10磅10分钟

  布类、玻璃制品、金属器械等 15磅20分钟

  三、滤过消毒

  【适用范围】 大多数培养用液,如人工合成培养液、血清、酶溶液等(这些在高温下会发生变性,失去其功能,必须采用滤过法除菌。

  【常用滤器】 Zeiss滤器、微孔滤膜滤器及各种不同规格的一次性滤器。常用孔径0.22um滤膜过滤一般用液即可。

  【注意】

  (1)滤膜用后丢弃,滤器清洗也比较方便,先用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净,用自来水冲洗后,再用蒸馏水冲洗,凉干即可;

  (2)用前再装上一张新的滤膜;

  (3)消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都用纸包装好,以保证消毒时的效果;

  (4)消毒后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧;

  (5)滤过少量液体时,用一种能安装在注射器上的小滤器,使用相同的滤膜,滤过时把滤过物装入注射器针管内,压出过滤物注入无菌容器中即。

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干细胞科学家们提出了一个有关人类血液生成机制的全新观点,颠覆了自上世纪60年代以来的传统教条。发表在《科学》(Science)杂志上的研究结果,证实“过去我们认为知道的一个经典的‘教科书’观点实际上并不存在,”多伦多大学分子遗传系教授、大学健康网络(UHN)辖下玛格丽特公主癌症中心资深科学家John Dick博士说。“通过一系列实验,我们*终阐明了不同类型血细胞由干细胞,而非传统认为的进一步下游细胞快速形成的机制。”这一研究还颠覆了教科书上血液发育系统一旦形成便保持稳定这一观点。Dick博士说:“事实并非如此。我们的研究结果表明,血液系统是双层的,在早期人类发育期和成年期之间改变。”共同作者、来自Dick实验室的Faiyaz Notta和Sasan Zandi博士写道,在重新定义血液发育的体系结构时,研究小组绘制出了从处于各种生命阶段和年龄的人类血液样本处获得的,33个不同干细胞和祖细胞群中近3000个单细胞的谱系潜能。对于罹患血液系统疾病的人而言,研究结果的潜在临床意义重大,为个体化治疗开启了一条不同的路径。Dick博士说:“我们的研究发现意味着,我们将能够更好地了解从贫血(缺乏足够的血细胞)到白血病(有太多血细胞)多种人类血液病。可以把它看作是从黑白电视的旧世界进入到了高清晰的新世界。”Dick博士说,其还有望推动全球寻求再生医学,通过改造细胞来生成诸如血小板或红细胞等成熟细胞类型。Dick与大学健康网络McEwen再生医学中心主任Gordon Keller开展了密切合作。“通过结合Keller小组优化诱导多能干细胞的能力以及我们新鉴别的只生成血小板和红细胞的祖细胞,我们能够开发出一些更好的方法来生成这些成熟细胞。”当前,由于血小板不能储存或冷冻,人类捐献者是血小板**的来源,成千上万的癌症和其他耗弱性疾病的患者都需要输注血小板。当前的发现是建立在Dick博士2012年发布在Science杂志上一项突破性研究基础之上,当时研究小组分离出了*纯的人类造血干细胞——一个干细胞就可以再生出整个血液系统。“4年前,当我们分离出纯干细胞时,我们认识到我们还发现了像‘子细胞’一样的干细胞群,当时我们认为它们是其他类型的干细胞,”Dick博士说。“当我们进一步深入研究这些‘子细胞’时,我们发现它们实际上是已经成熟的血细胞谱系。换句话说,谱系几乎直接从干细胞层中断,没有通过缓慢的逐步的‘教科书’过程向下游发育。”“因此在人类血液形成过程中,一切均始于干细胞,它是行政决策者快速驱动了这一过程,以每日超过3000亿个细胞的产量来补充血液。”25年来,Dick博士一直专注于认识移植后正常造血干细胞发挥作用来再生人类血液的细胞过程,及当白血病发生时血液发育出错的机制。他的研究追踪了玛格丽特公主癌症中心科学家James Till博士及已故Ernest McCulloch博士于1961年获得的关于造血干细胞的初期研究发现——它奠定了当前所有干细胞研究的基础。

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 近日研究人员在《科学》(Science)杂志上发表论文称发现了癌细胞免疫逃逸的新机制——利用支持细胞包围肿瘤,保护它免于激起免疫反应。新研究发现为科学家们提供了新的治疗靶点激活机体的自然防御系统对抗肿瘤细胞。   “研究揭示了肿瘤微环境中的某些基质细胞与免疫系统之间的联系,”芝加哥大学免疫学家Hans Schreiber说道:“这是一个了不起的发现。”   长期以来研究者都希望了解癌细胞逃避免疫系统攻击的机制。过去的研究证实在肿瘤动物模型中即使启动免疫反应,对肿瘤的损伤亦不大,这是因为邻近的免疫细胞不能对肿瘤发动攻击。论文的资深作者、剑桥大学的免疫学家Douglas Fearon说:“在肿瘤中存在某种机制抑制了免疫反应。”   在良性结缔组织中存在一类癌细胞称为基质细胞。Fearon和他的同事推测表达成纤维细胞活化蛋白(FAP)的基质细胞有可能参与了免疫系统抑制。因为在子宫、胎盘和慢性炎症区域都存在FAP表达细胞,在那些部位它们的主要作用是抑制或控制炎症反应。研究人员构建了一种转基因小鼠模型,当对其进行遗传操作时可杀死小鼠体内的FAP表达细胞。研究人员首先给予小鼠白喉毒素,然后给小鼠注入肿瘤。两或三周后,当肿瘤模型完全构建起来后,研究人员通过遗传操作清除掉动物体内FAP+细胞。   研究人员发现在48小时内小鼠启动了免疫反应杀死了80-90%的肿瘤。而在对照组中,研究人员对缺乏免疫系统的小鼠进行了同样的实验操作,FAP+细胞的去除并没有对肿瘤产生任何效应。“我们必须将去除FAP+细胞与免疫系统反应结合起来,”Fearon说:“这表明通过去除FAP+细胞导致的肿瘤细胞受到了免疫系统的调控。”   在接下来的实验中,研究人员计划在自发性肿瘤小鼠模型中进一步验证他们的发现。自发肿瘤模型小鼠是由英国癌症研究中心构建的一种肿瘤发生与人类非常接近动物模型。   “研究表明FAP+细胞可作为一个重要的癌症药物靶点,”Schreiber说:“然而尽管现在已获得了FAP的抗体,我们面临着一个主要困难是如何能够不影响其他表达FAP的良性细胞。”   “假设研究人员能够确定FAP+细胞进入肿瘤或是它们抑制免疫反应的机制,他们或许就有可能能够阻断细胞进入肿瘤或阻断其对免疫细胞的抑制,”Fearon说:“至少我们现在发现了肿瘤细胞中存在一种非常特殊的细胞类型导致了免疫系统抑制。这也是一个关键的进步,”

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